核酸提取 氯仿 异丙醇的作用
酚氯仿法提取dna主要步骤：
1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量dna裂解液（300μl），研磨后再加入300μldna裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶k，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃，5h）。
4.加入等体积的tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心。12000r，7min，4℃。离心后分成上中下三层，上层为dna，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25：24：1。
8.在含有上清液的离心管中加入tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心。12000r，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24：1）。
11.离心。12000r，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。-20℃过夜。
13.将样品取出，12000r，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（dna），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取dna完成。
溴氯仿法提取dna的原理：
用酚抽提细胞dna时，有什么作用。
使蛋白质变性，同时抑制了dnase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与dna联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而dna溶于水相。
使用酚的优点：
1.有效变性蛋白质；
2.抑制了dnase的降解作用。
缺点：
1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（a）rna。
2.不能完全抑制rnase的活性。氯仿的作用。
氯仿。克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提。去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）
用酚－氯仿抽提细胞基因组dna时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么。异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含dna的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
用乙醇沉淀dna时，为什么加入单价的阳离子。
用乙醇沉淀dna时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如nacl或naac，na+中和dna分子上的负电荷，减少dna分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
原理。动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（dnp）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/l氯化钠），但在0.14mol/l氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（rnp）则在0.14mol/l氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。
将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（sds）溶液，使dna与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/l，使dna溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯dna。最后用95%乙醇沉淀dna。
溶解。将离心后除去rna的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。加4毫升10％sds溶液，使溶液的sds浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60℃水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/l，充分搅拌10分钟；
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