核酸提取 氯仿 异丙醇的作用

试验原理：

苯酚/氯仿提取dna是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，sds（十二烷基磺酸钠）将细胞膜裂解，在蛋白酶k、edta的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使dna从核蛋白中游离出来。dna易溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层（有机相），dna存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去dna溶液中的酚。抽提后的dna溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/lnacl存在下沉淀dna，回收dna用70%乙醇洗去dna沉淀中的盐，真空干燥，用te缓冲液溶解dna备用。试验步骤：

1、将1mledta抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（pbs），混匀，3500rpm离心15min，倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用0.7mldna提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。

2、将上述dna提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶k0.2ml，至终浓度为100-200ug/ml，上下转动混匀，液体变粘稠。50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。