核酸的提取

授课教师学生人数55课题实验二植物基因组dna的提取授课类型新授课授课方法讲授、演示教学目的掌握ctab法提取植物基因组dna的原理与方法教学重点理解每一步实验操作的目的教学难点实验操作过程中的一些注意事项教学过程

一、背景知识

1.dna在细胞中存在的位臵。植物细胞dna存在的位臵和动物细胞有何不同。（图）教学用具多媒体

2.dna的存在形式

双螺旋结构图

双螺旋结构组成

染色体是怎样形成的。

一级结构（核小体=双螺旋+组蛋白）-二级结构（螺线管）-三级结构（超螺线管）-四级结构（染色体）

真核生物基因组dna是经过四级包装形成了染色体，先是dna形成双螺旋结构，再与组蛋白形成核小体（一级结构），压缩7倍，再形成螺旋管（二级结构），压缩6倍，之后再形成超螺旋管（三级结构），压缩40倍，最后超螺旋管压缩形成染色体（四级结构），再压缩5倍，正常细胞中基因组dna是以染色质（相当于一级结构）形式存在，在细胞分裂的中期以染色体形式存在，真核生物细胞质dna主要是以裸露的环状dna形式存在，没有核小体结构。

3.遗传物质核酸除了dna外还有另外一种，即rna，它与dna在结构上的区别。（图）

rna基本单位中间的五碳糖是核糖，含氮碱基尿嘧啶（u）替代胸腺嘧啶（t）4.核酸的理化性质

（1）形状。dna为白色类似石棉样的纤维状物，rna的纯品呈白色粉末或结晶。

（2）溶解性：一般都溶于水，不溶于乙醇、异丙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。（3）保存：在酸性溶液中，核酸易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。

二、实验目的

1.掌握ctab法提取植物基因组dna的原理2.ctab法提取植物基因组dna的实验方法

三、实验原理

1.核酸在细胞中的存在方式，

是以核酸-蛋白质复合物的形式存在，如一级结构核小体（图）：dna螺旋+组蛋白

2.通过低温研钵破坏植物细胞壁

3.加入ctab溶解细胞膜，ctab与核酸形成核酸-ctab复合物，使核酸与蛋白质分离。

4.加入高盐溶液溶解核酸-ctab复合物，加入蛋白质变性剂使蛋白质变性沉淀出来，离心除去蛋白质。

5.加入核酸沉淀剂，溶解ctab，并使和核酸沉淀出来，离心得到核酸沉淀。

四、实验仪器1.水浴锅

2.离心机（12管）：3台3.研钵：10个

4.移液枪（包括枪头）：1ml、400ul

五、实验材料与药品

实验材料：新鲜菠菜叶片1.十六烷基三甲基溴化铵（ctab）

作用：溶解细胞膜并与核酸结合，便于分离核酸。商品信息：瓶装/100g。

理化性质。白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水，震荡时产生大量泡沫，化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。有吸湿性，在酸性溶液中稳定；溶于10份水，溶于热水、乙醇、三氯甲烷，易溶于异丙醇水溶液，微溶于丙酮，不溶于乙醚和苯。

储存：在阴凉，干燥，通风良好的地方，远离不相容的物质。危害：高毒，对皮肤及粘膜刺激性小，有轻微脱脂作用。

2.1mtris-hclph8.0缓冲液

作用：提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏商品信息：瓶/100ml，无色、澄清溶液

理化性质。tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷，瓶/500g。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性的化学物质。

储存。室温保存。

危害。毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。

3.乙二胺四乙酸二钠（edta-2na）

作用。螯合mg2+或mn2+离子，抑制脱氧核糖核酸酶（dnase）活性，活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。

商品信息。瓶/250g。