讲稿6 市售双氧水中过氧化氢含量的测定

植物组织中淀粉含量的测定2007-01-1208：55Ⅰ蒽酮硫酸法

一、原理

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料任何植物材料。

（二）试剂

浓硫酸（比重1.84）。

9.2mol/lhclo4。

2%蒽酮试剂，同实验24。

（三）仪器设备

电子天平，容量瓶。100ml4个、50ml2个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管0.5ml1支、2.0ml3支、5ml4支，分光光度计，记号笔。

三、实验步骤

1.标准曲线制作

取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

表24-3各试管加入标准液和蒸馏水量

管号01～23～45～6

7～89～10淀粉标准液（ml）

00.40.81.21.62.0蒸馏水（ml）

2.01.61.20.80.40

淀粉含量（mg）

040801201602002.样品提取称取50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15ml刻度试管中，加入6～7ml80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。重复提取两次（各10min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3ml，转移至50ml容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。

向沉淀中加蒸馏水3ml，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min。冷却后，加入2ml冷的9.2mol/l高氯酸，不时搅拌，提取15min后加蒸馏水至10ml，混匀，离心10min，上清液倾入50ml容量瓶。再向沉淀中加入2ml4.6mol/l高氯酸，搅拌提取15min后加水至10ml，混匀后离心10min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀1～2次，离心，合并离心液于50ml容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。

3.测定取待测样品提取液1.0ml于试管中，再加蒽酮试剂5ml，快速摇匀，然后在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出淀粉含量（mg）。

四、结果计算：含量（%）=100*c*vt/v1*1000*w

式中。c——从标准曲线查得淀粉量，mg。vt——样品提取液总体积，ml。v1——显色时取样品液量，ml。w——样品重，g。

0.9——由葡萄糖换算为淀粉的系数。

Ⅱ碘-淀粉比色法

一、原理

对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料任何植物材料。

（二）试剂

1.80％硝酸钙溶液。

2.0.5％碘液。称5.00g结晶碘和10.00g碘化钾，放入研钵混合干研，然后加10ml蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入1000ml容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。

3.5％含碘硝酸钙溶液。取10ml80％的硝酸钙溶液，加入160ml水再加入3ml0.5％的碘液混匀，现用现配。

4.标准淀粉溶液。称取纯淀粉50mg于研钵中，加3ml80％硝酸钙溶液，研细并转移到100ml的三角瓶中，用15ml80％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸5min，冷却后全部转入50ml容量瓶中并定容。此液为1mg/ml的淀粉标准液。